多平臺、多方法RNA文庫構建
RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補配對原則,轉錄而形成的一條單鏈,主要功能是實現(xiàn)遺傳信息在蛋白質上的表達,是遺傳信息傳遞過程中的橋梁,主要存在于生物細胞以及部分病毒、類病毒中。
眾所周知,total RNA中95%以上都是核糖體RNA(rRNA),可rRNA卻非常保守,在不同的組織、器官當中的表達極度穩(wěn)定; 而只占total RNA總量2%-3%的mRNA在RNA當中信息含量卻最為豐富,因此mRNA成為人們在科學研究中的重要關注點。
組織或細胞總RNA中各種RNA分布餅狀圖
而某個物種的特定組織或細胞在某一生理功能狀態(tài)下發(fā)生的mRNA產物的轉錄,即轉錄組,是基因組遺傳信息傳遞和表達的重要步驟和過程。
通過高通量mRNA測序可以獲得大量轉錄本序列信息,定量基因轉錄表達水平,獲得基因組轉錄區(qū)域及其位點信息等,在基因組序列拼接注釋、樣品間基因轉錄差異表達及其功能研究等方面有重要作用??蓮恼w水平研究基因功能以及基因結構,揭示特定生物學過程以及疾病發(fā)生過程中的分子機理,已被廣泛應用于基礎研究、臨床診斷和藥物研發(fā)等領域。
RNA樣本的建庫質量對于后續(xù)上機測序至關重要,可直接影響后續(xù)結果的分析。因此,一個好的建庫試劑盒對于RNA測序至關重要。全式金目前已推出2款RNA建庫試劑盒,分別適用于Illumina和MGI平臺,均具有高數(shù)據(jù)質量、高文庫轉化率的特點。
快速RNA建庫
? TransNGS? Fast RNA-Seq Library Prep Kit for Illumina?
針對Illumina高通量測序平臺開發(fā)的專用于構建鏈特異性或非鏈特異性轉錄組文庫的試劑盒,可一步完成二鏈合成、末端修復與加A反應,中間不需要純化步驟,極大地簡化了操作流程,縮短了建庫時間,可在3 h之內將0.1 ng-100 ng處理后的RNA構建成高質量的測序文庫,得到的文庫產量高、信息完整。
● 文庫構建原理示意圖
● 與競品的比較
使用 mRNA 純化試劑盒對人、小鼠、小麥和煙草的總RNA進行mRNA捕獲,其中人和小鼠投入200 ng總RNA,小麥和煙草投入1000 ng總RNA;分別使用TransGen和Company V建庫試劑盒進行RNA文庫構建,文庫分選后檢測文庫產量、峰型,并進行測序分析。
? 文庫產量
? 建庫峰型
?測序數(shù)據(jù)質量
?相關性分析
? TransNGS? Fast RNA-Seq Library Prep Kit for MGI?
本產品是針對MGI高通量測序平臺開發(fā)的專用于構建鏈特異性或非鏈特異性轉錄組文庫的試劑盒,可一步完成二鏈合成、末端修復與加A反應,中間不需要純化步驟,簡化了操作流程,縮短了建庫時間,可在3 h之內將0.1 ng-100 ng處理后的RNA構建成高質量的測序文庫,得到的文庫產量高、信息完整。
● 文庫構建原理示意圖
● 與競品的比較
使用TransGen和Company Y產品進行RNA建庫,比較不同投入量、不同物種、不同完整度RNA 建庫效果。TransGen 產品在產量上較競品有較大優(yōu)勢,適配不同物種、不同質量的RNA 的樣品,片段化條件兼容性強,各種類鏈特異性文庫中的鏈特異性占比都在98% 以上,測序數(shù)據(jù)質量優(yōu)異。
?文庫產量
?文庫峰型
?測序數(shù)據(jù)質量
相關產品推薦
? TransNGS? rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)
●產品特點
? 可有效去除人/小鼠/大鼠高達99%的ribosomal RNA。
? 提供Control qPCR Primer Sets,檢測去除前后ribosomal RNA和非ribosomal RNA含量的變化。
●穩(wěn)定性數(shù)據(jù)
分別使用不同批次產品對1 μg 總RNA (HepG2 細胞) 進行rRNA 去除 ,并使用rRNA Primer 和Non-rRNA Primer 對未去除和去除后的RNA 樣品同時進行qRT-PCR 檢測,根據(jù)不同引物的ΔCq 值變化( 去除后樣品Cq 值減去未去除樣品Cq 值) 判斷產品批次間的穩(wěn)定性,不同批次間ΔCq 值無明顯差異,產品批次間穩(wěn)定性好。
●與競品的比較
1 μg人(Human, H)、小鼠(Mouse, M)和大鼠(Rat, R)總RNA樣品,分別使用TransGen和Company K產品去除rRNA后,進行建庫(TransGen, KP601)測序及分析,結果表明,TransGen產品在測序數(shù)據(jù)質量上與競品相比,性能一致,甚至優(yōu)于競品。
? MagicPure? mRNA Kit
●產品特點
? mRNA捕獲效率高
?樣本兼容性好
?測序數(shù)據(jù)質量高
? 適用物種廣泛
●文庫產量
使用TransGen mRNA 純化試劑盒 (EC511)、Company V 及Company Y 同類產品對不同投入量及不同物種進行mRNA 捕獲后建庫,結果顯示,TransGen 產品mRNA 得率高,純度高,搭配建庫試劑盒,文庫產量更高,測序數(shù)據(jù)質量更好
產品信息